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细胞分化理论与技术平台
2014-05-29 17:14   发布范围:公开

 

          细胞分化理论与技术平台的教学、科研队伍有4人,其中博士生导师1人,硕士生导师1人。学术带头人卢兹凡教授,在美国留学多年,2003年回国后带领团队在细胞分化理论与技术方而形成了特色。本平台有学术骨干有卢兹凡、傅海燕、杨国栋等。目前指导在读硕士生2人。

        实验室曾先后承担国家杰出青年科学基金B类、国家自然科学基金面上;全军医药卫生面上、全军医药卫生重点等类横项和纵项课题多项,累计资助经助超过百万。

 

重要的研究发现

 

1.RNA及RNA结合蛋白在细胞活动和疾病状态下的分子机制

        发现RNA结合蛋白QKI具有促进结肠癌细胞凋亡、抑制细胞增殖的功能。主要取得了如下结果:发现肿瘤细胞中QKI表达明显降低,部分细胞甚至表达缺失;进一步分析发现,QKI启动子甲基化程度与基因表达量负相关。与此一致,临床样本中,QKI在肿瘤组织中的表达也明显降低,而其启动子甲基化程度明显增加。这部分实验表明QKI启动子甲基化是其在结肠肿瘤中表达降低的主要原因。过表达QKI,细胞分化标志碱性磷酸酶的活性增高、乳糖酶的表达增加;相反RNA干涉QKI,降低了碱性磷酸酶的活性,抑制了乳糖酶的表达;表明QKI可以促进细胞分化。MTT实验和软琼脂克隆形成实验都证实QKI可抑制细胞增殖。UTR报告系统和RNA的免疫共沉淀实验确认了QKI与β-catenin,p27mRNA存在相互作用和作用元件,增强p27的表达和调节β-catenin的表达和亚细胞分布。我们的研究为进一步探讨QKI在结肠肿瘤中的诊断及治疗中的价值提供了线索。发表1篇研究论文,影响因子为12.591,Letter 2篇。

 

         2.新基因的功能研究

         用不同的方法分别克隆了多个新的人cDNA,包括era、lpr、restin等。在对Restin的研究中发现它是黑色素瘤抗原家族同源基因。Restin基因表达谱研究发现它主要表达在干细胞和终末分化细胞,在肿瘤细胞中表达明显降低或不表达,细胞表达分布主要在细胞核;在肿瘤细胞中导入Restin,对细胞增殖具有抑制作用;维甲酸可以明显诱导该基因在肿瘤细胞中表达,p53对该基因的表达有增强作用;构建了96种蛋白激酶和32种转录因子的细胞双杂交载体,发现Restin与多种蛋白激酶有弱相互作用,与转录因子ATF3有强烈相互作用。克隆了Restin结构基因上游2kb的DNA片段,并构建了荧光报告系统,利用维甲酸诱导证明该报告系统接受维甲酸的诱导。用p53诱导上述荧光报告系统,结果发现p53也可以诱导荧光素酶基因的表达。

         3. 基因表达技术研究

        为获得不同细胞间基因表达差异的信息,对现有的基因表达差式筛选技术进行了改进,建立了改良的基于PCR的削减杂交法 (BioTechniques,2000;J Biotechnology, 1999)。该方法的创新点是:(1) 将反转录全过程和加接头反应一步完成,可以在反转录的同时使cDNA两端均加上接头,使得利用PCR进行的cDNA扩增更加容易,并提高了获得全长cDNA的机率;(2)对其中的PCR体系进行了改进,同时对模板在常规提取的基础上进行Sephacryl S-400 层析,去除过短的反转录产物。这些改进使得获得全长cDNA的机会更大。上述方法的建立,克服了长期使用的DDPCR(differential display PCR)方法仅可以获得300-500碱基对的EST序列,后续获取cDNA全长仍需大量工作的缺陷。研究群体利用这项技术克隆了数种肿瘤组织与正常组织、炎症细胞与正常细胞间的差异表达基因,取得了一系列新的发现

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